目前已經(jīng)有大約100款雙特異性抗體處于臨床開發(fā)階段，而藥物研發(fā)人員仍在嘗試為不斷擴(kuò)增的抗體“工具箱”添加更多功能。賽諾菲等公司對(duì)能夠結(jié)合多個(gè)治療靶點(diǎn)的多特異性抗體候選藥物倍感興趣，并且正在評(píng)估多特異性抗體是否可以用于癌癥和感染性疾病。

今年8月，賽諾菲將其第二款三特異性抗體SAR442257推進(jìn)至了臨床階段。全球范圍內(nèi)其他一些三特異性抗體項(xiàng)目也正在穩(wěn)步向前推進(jìn)（下表）：GT Biopharma公司今年早些時(shí)候?qū)⑵淙禺愋宰匀粴∟K）細(xì)胞銜接器（engager）GTB-3550推進(jìn)到I/II期試驗(yàn)，用于治療高風(fēng)險(xiǎn)血液系統(tǒng)惡性腫瘤。Innate Pharma正在研究用于治療癌癥的三特異性NK細(xì)胞銜接器。Molecular Therapeutics正計(jì)劃將其多特異性抗體藥物開發(fā)用于治療COVID-19。近年來(lái)，包括Numab Therapeutics在內(nèi)的幾家公司也陸續(xù)報(bào)告了關(guān)于多特異性免疫細(xì)胞銜接器的臨床前數(shù)據(jù)。

圖片來(lái)源：Nature reviews drug discovery

從HIV到腫瘤

賽諾菲首次嘗試三特異性抗體時(shí)將注意力聚焦在了HIV身上。賽諾菲的首席科學(xué)官Gary Nabel博士解釋說(shuō)：“我們?cè)贖IV中對(duì)其進(jìn)行了研究，這是一個(gè)很好的概念驗(yàn)證?！?

Nabel的團(tuán)隊(duì)已經(jīng)鑒定出了大量可以殺滅HIV病毒的中和抗體。但是HIV變異很快，很快就會(huì)出現(xiàn)逃避突變，從而限制了單藥療法的臨床應(yīng)用。Nabel表示，單抗的雞尾酒療法理論上可以被用來(lái)應(yīng)對(duì)耐藥性的出現(xiàn)，但在實(shí)際開發(fā)中面臨著巨大的障礙——對(duì)每種抗體進(jìn)行毒理學(xué)和藥代動(dòng)力學(xué)評(píng)估會(huì)大大增加了臨床前的工作量。監(jiān)管機(jī)構(gòu)通常要求每一種抗體單獨(dú)或聯(lián)合檢測(cè)，這就導(dǎo)致產(chǎn)生一些不實(shí)用的昂貴的試驗(yàn)。生產(chǎn)和質(zhì)量控制要求給他們帶來(lái)了挑戰(zhàn)。相比之下，三特異性抗體提供了一種簡(jiǎn)化的策略。Nabel說(shuō)：“這是考慮開發(fā)三特異性抗體的一個(gè)非?，F(xiàn)實(shí)的理由?！?

他的研究小組2017年在Science雜志上發(fā)表的報(bào)道顯示，一種三特異性抗體SAR441236能夠獨(dú)立地結(jié)合HIV包膜的3種不同的表位，從而賦予非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物對(duì)類人猿HIV混合體的完全免疫。該項(xiàng)目的主要候選藥物SAR441236于4月進(jìn)入I期試驗(yàn)。

在發(fā)現(xiàn)和優(yōu)化這種抗體的同時(shí)，Nabel將三特異性抗體應(yīng)用于其他疾病的熱情也被激發(fā)。一方面，Nabel發(fā)現(xiàn)三特異性抗體具有與典型抗體一致的藥代動(dòng)力學(xué)特性，這讓研究小組確信這些藥物很有可能在人類身上發(fā)揮預(yù)期的作用。另一方面，新藥發(fā)現(xiàn)和生產(chǎn)制備技術(shù)也已經(jīng)可以勝任這項(xiàng)開放任務(wù)。賽諾菲甚至還發(fā)現(xiàn)三特異性抗體的產(chǎn)量比雙特異性抗體更好。Nabel說(shuō)：“從生產(chǎn)的角度來(lái)看，這是一件大事，因?yàn)檫@意味著我們現(xiàn)在能夠以性價(jià)比更高的成本生產(chǎn)所需的藥品?！?

賽諾菲的第二個(gè)三特異性抗體項(xiàng)目SAR442257則顯示了這類藥物在腫瘤免疫學(xué)應(yīng)用中的潛力。目前，藥物研發(fā)人員已經(jīng)接受了可以鏈接T細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞的雙特異性抗體，這種T細(xì)胞銜接器有助于激活免疫細(xì)胞，并使它們接近癌細(xì)胞，理想情況下可以促使病情緩解。FDA于2014年批準(zhǔn)了開創(chuàng)性的T細(xì)胞銜接器，即Amgen的CD3xCD19雙特異性抗體藥物 blinatumomab，用于治療急性淋巴細(xì)胞白血?。ˋLL）。然而，這種雙特異性的T細(xì)胞銜接器仍面臨毒性較大的挑戰(zhàn)，且在實(shí)體瘤中活性有限。

對(duì)于賽諾菲來(lái)說(shuō)，CD3xCD28xCD38三特異性抗體SAR442257提供了一種可行的策略。沉默狀態(tài)的T細(xì)胞至少需要兩個(gè)信號(hào)事件才能激活，因此賽諾菲的方法是設(shè)計(jì)一種可以結(jié)合T細(xì)胞上CD3和CD28的抗體，同時(shí)提供激活和共刺激信號(hào)。而CD38在多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞中高表達(dá)，可將T細(xì)胞定向到骨髓瘤細(xì)胞，以及某些淋巴瘤和白血病細(xì)胞。強(qiáng)生公司的CD38單抗藥物daratumumab已經(jīng)證實(shí)了這一靶點(diǎn)的潛力，一些分析師預(yù)測(cè)daratumumab的銷售峰值將達(dá)到100億美元。SAR442257的I期試驗(yàn)于8月開始招募患者。

關(guān)于SAR441236和SAR442257，Lava Therapeutics首席執(zhí)行官Paul Parren說(shuō)：“我期待看到這些藥物分子未來(lái)的發(fā)展。兩者的科學(xué)理論基礎(chǔ)是合理的?！钡铝τ赿aratumumab開發(fā)的Parren對(duì)它們的安全性表示擔(dān)憂。

藥物與CD3的結(jié)合與細(xì)胞因子釋放綜合征有關(guān)， blinatumomab的藥品標(biāo)簽也因此攜帶了黑框警告。另一方面的擔(dān)憂則可以追溯到2006年TeGenero的CD28特異性激動(dòng)型抗體TGN1412的試驗(yàn)。在該試驗(yàn)中，細(xì)胞因子釋放綜合征導(dǎo)致所有6名受試者住院，并導(dǎo)致其中4名受試者多器官功能障礙。由于CD38在許多類型細(xì)胞中廣泛表達(dá)，這增加了這種三特異性T細(xì)胞銜接器攻擊健康細(xì)胞的風(fēng)險(xiǎn)。

盡管如此，Nabel相信三特異性抗體的臨床試驗(yàn)可以安全地進(jìn)行。經(jīng)典抗體對(duì)每個(gè)靶點(diǎn)有兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，賽諾菲的三特異性抗體對(duì)每個(gè)靶點(diǎn)只有一個(gè)結(jié)合位點(diǎn)。因此，三特異性的總結(jié)合強(qiáng)度或親和力比典型抗體藥物低數(shù)千倍。

Nabel解釋說(shuō)：“我們要做的是盡量減少off-target效應(yīng)，最大限度地提高特異性能力”。當(dāng)賽諾菲再次分析TGN1412的細(xì)胞因子風(fēng)暴不良反應(yīng)時(shí)，他們發(fā)現(xiàn)單一CD28特異性抗體不會(huì)產(chǎn)生毒性信號(hào)。SAR445257對(duì)非人類靈長(zhǎng)類動(dòng)物的毒性也可以接受。賽諾菲也在探索其他控制毒性的方法，包括替代的給藥途徑和周期。

征募NK細(xì)胞

Innate Pharma公司首席科學(xué)官Eric Vivier及其同事計(jì)劃使用三特異性抗體來(lái)釋放NK細(xì)胞的抗癌活性。NK細(xì)胞是一類先天免疫細(xì)胞，其特點(diǎn)是能夠快速識(shí)別和消除威脅。Vivier推測(cè)，由于NK細(xì)胞的分布率是T細(xì)胞的十分之一，因此NK銜接器可能比T細(xì)胞銜接器具有更好的安全性。

Vivier和同事們把重點(diǎn)放在了NKp46和CD16上，它們是參與NK細(xì)胞活化的關(guān)鍵成員。NKp46是一種糖蛋白，在免疫細(xì)胞亞群中表達(dá)，對(duì)NK細(xì)胞功能尤為重要。“NKp46是目前已知的最特異的激活NK細(xì)胞受體”，Vivier說(shuō)道。CD16在更廣泛的免疫細(xì)胞上表達(dá)，但它在NK介導(dǎo)的抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性（ADCC）中起著關(guān)鍵作用。因此，這兩個(gè)靶點(diǎn)被推測(cè)能很好地協(xié)同工作。

臨床前數(shù)據(jù)證實(shí)了這一點(diǎn)。去年在Cell雜志發(fā)表的一篇論文中，Vivier的團(tuán)隊(duì)測(cè)試了各種NK銜接器組合的活性。這些細(xì)胞要么僅通過(guò)NKp46要么通過(guò)NKp46和CD16兩者招募免疫細(xì)胞，并通過(guò)CD19、CD20或EGFR結(jié)合癌細(xì)胞。雙特異性抗體是活躍的，而三特異性抗體表現(xiàn)得更好。Vivier說(shuō)：“當(dāng)結(jié)合NKp46和CD16的作用時(shí)，基本上可以將效力提高1000倍?！?

Innate現(xiàn)在正與阿斯利康合作開發(fā)基于NKp46的三特異性和多特異性候選藥物。Vivier推測(cè)，能夠結(jié)合一種以上癌癥抗原的候選藥物將可能受益于更高的特異性。Innate還與賽諾菲公司合作開發(fā)基于NKp46的雙特異性抗體。目前還沒(méi)有披露這些NK銜接器的進(jìn)展時(shí)間表。但Vivier對(duì)目前的進(jìn)展感到高興，他說(shuō)：“在這個(gè)階段，我們認(rèn)為三特異性銜接器的發(fā)展沒(méi)有任何不利之處?！?

雞尾酒療法取而代之？

在某些情況下，抗體組合療法的表現(xiàn)可能與多特異性抗體一樣好或者更好。就在賽諾菲將其三特異性T細(xì)胞銜接器推向臨床的同時(shí)，Regeneron也在準(zhǔn)備測(cè)試雙特異性抗體組合策略，以達(dá)到類似的免疫治療效果。

Regeneron癌癥免疫學(xué)高級(jí)主任Dimitris Skokos說(shuō)：“盡管人們對(duì)三特異性免疫細(xì)胞銜接器越來(lái)越感興趣，但雞尾酒療法可能會(huì)達(dá)到類似或更好的效果?！?

今年早些時(shí)候，他的團(tuán)隊(duì)展示了結(jié)合CD3和CD28的雙特異性抗體如何組合以實(shí)現(xiàn)共同刺激T細(xì)胞的作用。他們?cè)赟cience Translational Medicine上發(fā)表的報(bào)道說(shuō)，這些藥物的聯(lián)合治療效果優(yōu)于單藥療法，同時(shí)也避免了與CD28相關(guān)的細(xì)胞因子釋放綜合征的風(fēng)險(xiǎn)。

對(duì)于Skokos來(lái)說(shuō)，這種組合方法相比三特異性抗體具有更好的靈活性。以賽諾菲的SAR442257為例，該公司不得不預(yù)先確定CD3/CD28/CD38的比率。但是如果這個(gè)比例在臨床需要調(diào)整呢？相比之下，使用雞尾酒策略可以在試驗(yàn)中滴定測(cè)量藥劑以優(yōu)化活性。同樣，如果共刺激信號(hào)的序列很重要，研究人員可以改變雙特異性藥物的給藥順序，以找出哪個(gè)時(shí)機(jī)最有效。

Regeneron的雙特異性抗體組合療法已經(jīng)接近或者正在開展臨床試驗(yàn)。例如，該公司計(jì)劃在今年晚些時(shí)候開展評(píng)估CD28xMUC16雙特異性結(jié)合CD3xMUC16雙特異性或其PD1抑制劑cemiplimab聯(lián)合治療卵巢癌的臨床試驗(yàn)。另外，Regeneron也已經(jīng)在評(píng)估CD28xPSMA雙特異性抗體與cemiplimab聯(lián)合治療前列腺癌的療效。它還計(jì)劃在今年晚些時(shí)候開始評(píng)估CD28xEFGR雙特異性抗體聯(lián)合cemiplimab的療效。

Skokos說(shuō)：“我們正在投入大量資金，推動(dòng)使用我們的CD28共刺激雙特異性平臺(tái)的多種組合策略?！钡@也不是說(shuō)Regeneron已經(jīng)放棄了三特異性抗體。他補(bǔ)充道：“我們對(duì)復(fù)雜的多靶標(biāo)方法非常感興趣，我們確實(shí)在探索。不過(guò)最終每個(gè)項(xiàng)目都需要根據(jù)自身的優(yōu)點(diǎn)、臨床前數(shù)據(jù)和臨床機(jī)會(huì)進(jìn)行評(píng)估?！?

在賽諾菲，Nabel也在采取實(shí)證方法?！拔也幌虢o任何人留下這樣一種印象：即我們對(duì)單抗/雙抗/三抗有某種偏好”，他表示：“我們希望在任何醫(yī)學(xué)應(yīng)用中，使用我們能使用的最好的藥物分子。”

參考資料：

1# Trispecific antibodies take to the clinic (來(lái)源：Nature reviews drugdiscovery)

2# Lan Wu et al. Trispecific antibodies enhance thetherapeutic efficacy of tumor-directed T cells through T cell receptorco-stimulation. Nature Cancer (2020)

3# Laurent Gauthier et al. Multifunctional Natural Killer Cell Engagers Targeting NKp46 Trigger Protective Tumor Immunity. Cell (2019)