恒定自然殺傷T細(xì)胞（Invariant natural killer T cells, iNKT cells）是一種先天樣CD1d限制性T細(xì)胞，表達(dá)恒定T細(xì)胞受體（iTCR），在胸腺中經(jīng)歷了一種獨(dú)特的分化程序，獲得了NK樣特性，包括具有強(qiáng)大的細(xì)胞毒性，可快速分泌細(xì)胞因子，可有效轉(zhuǎn)運(yùn)到組織中等。與NK細(xì)胞不同的是，NKT細(xì)胞的靶點(diǎn)識(shí)別受到CD1d限制（NKT細(xì)胞與由CD1d遞呈的糖脂相互作用），類似于T細(xì)胞識(shí)別靶點(diǎn)受HLA限制。在一些類型的腫瘤中，iNKT細(xì)胞在原發(fā)性腫瘤中的存在與良好的預(yù)后相關(guān)。大量研究顯示，iNKT細(xì)胞具有用于癌癥免疫治療的潛能。

來源：Nature Cancer

近日，在發(fā)表于Nature Cancer雜志上的一篇論文中，一個(gè)國際研究小組報(bào)道一種可穩(wěn)定iTCR–CD1d復(fù)合物相互作用的單鏈雙特異性抗體——VHH1D12。研究顯示，VHH1D12可有效刺激iNKT細(xì)胞，從而產(chǎn)生強(qiáng)大的抗腫瘤免疫反應(yīng)。

事實(shí)上，基于iNKT細(xì)胞的療法已經(jīng)在一些癌癥中顯示出了安全性和有前景的臨床活性，這大大提升了研究者們通過靶向CD1d限制性iNKT細(xì)胞進(jìn)行癌癥治療的熱情。

圖1 iNKT細(xì)胞相關(guān)的療法 | a）使用CD1d特異性的外源性(Exog)脂質(zhì)抗原和衍生物來激活iNKT細(xì)胞應(yīng)答；b) 自體iNKT細(xì)胞治療，即在體外擴(kuò)增宿主的iNKT細(xì)胞群，再重新輸注給患者用于治療, iNKT細(xì)胞通過識(shí)別內(nèi)源性(Endog)配體介導(dǎo)細(xì)胞殺傷；c)同種異體iNKT療法，可通過改造使iNKT細(xì)胞表達(dá)嵌合抗原受體(CAR)或重組TCR (rTCR)，獲得識(shí)別腫瘤相關(guān)抗原(TAA)的能力；d）一種特異性靶向iNKT細(xì)胞特異性iTCR Vα24-Jα18區(qū)的抗體，依賴于Fc的類型，可導(dǎo)致iNKT細(xì)胞耗竭或激活；e）一種新型雙功能基于駱駝的單鏈抗體VHH1D12，該抗體能夠穩(wěn)定iTCR-CD1d相互作用，導(dǎo)致iNKT細(xì)胞介導(dǎo)的抗腫瘤反應(yīng)。(來源：Nature Cancer)

在臨床試驗(yàn)中調(diào)查iNKT細(xì)胞抗癌潛力的早期嘗試?yán)昧擞蒀D1d遞呈給iNKT細(xì)胞的高度特異性天然糖脂配體α-galactosylceramide (α-GalCer)（圖1a）。這種基于糖脂的療法可刺激1型輔助iNKT細(xì)胞反應(yīng)(抗病原體、抗腫瘤和促炎)和2型輔助iNKT細(xì)胞反應(yīng)(抗體誘導(dǎo)和免疫調(diào)節(jié))，因此引發(fā)了廣泛的免疫反應(yīng)。然而，盡管通過靜脈注射大劑量α-GalCer對(duì)iNKT細(xì)胞產(chǎn)生了免疫刺激作用，但這類療法在I期臨床試驗(yàn)中誘導(dǎo)的抗腫瘤反應(yīng)極小。之后，研究者們改變了遞送策略，轉(zhuǎn)而利用單核細(xì)胞來源的樹突狀細(xì)胞(DCs)來負(fù)載α-GalCer。盡管這種改變導(dǎo)致了客觀緩解，但α-GalCer及其衍生物在體內(nèi)壽命短且非常難溶，這使得它們的配制很有挑戰(zhàn)性。此外，自體負(fù)載α-GalCer的DC療法實(shí)際上復(fù)雜、耗時(shí)和昂貴。

如圖1b所示，一些基于iNKT細(xì)胞的自體療法也已進(jìn)入I期臨床試驗(yàn)，且顯示出了安全性和相對(duì)的臨床療效。同時(shí)，同種異體iNKT細(xì)胞療法也在向臨床開發(fā)階段邁進(jìn)（圖1c）。

其他調(diào)節(jié)iNKT細(xì)胞功能的治療方法是基于免疫調(diào)節(jié)抗體。如圖1d所示，一種iTCR靶向抗體已經(jīng)在I期臨床試驗(yàn)中接受了測試。此外，在過去的25年中，科學(xué)家們開發(fā)了多種CD1d特異性單克隆抗體(mAbs)，這些單克隆抗體傳統(tǒng)上被視為iNKT細(xì)胞阻斷劑，因?yàn)槠渲性S多抗體阻斷iNKT細(xì)胞與CD1d+細(xì)胞的相互作用。

圖2 CD1d特異性VHH1D12激活I(lǐng) 型NKT細(xì)胞（來源：Nature Cancer）

在最新發(fā)表于Nature Cancer上的這項(xiàng)研究中，Roeland Lameris等描述了一種偶然發(fā)現(xiàn)的、獨(dú)特的、iNKT細(xì)胞激動(dòng)性雙功能抗體的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。該抗體克隆(1D12)來自缺乏單抗Fc片段鏈的CD1d特異性基于駱駝的單鏈抗體（也被稱為“nanobodies”或“VHHs”）集合。篩選出的納米抗體VHH1D12之所以顯示獨(dú)特的激動(dòng)劑活性，是基于其能在相應(yīng)的脂質(zhì)抗原存在的情況下與CD1d和iNKT細(xì)胞TCR 同時(shí)結(jié)合，從而穩(wěn)定CD1d-脂質(zhì)-iTCR三元復(fù)合物(圖1e)。

圖3 VHH1D12可穩(wěn)定CD1d-I型 NKT TCR相互作用（來源：Nature Cancer）

研究顯示，VHH1D12結(jié)合到CD1d胞外域的一側(cè)，同時(shí)與iTCR的α鏈相互作用，形成了一個(gè)獨(dú)特的橋接，穩(wěn)定了CD1d–α-GalCer–iTCR的互相作用。這種獨(dú)特的特性可能是由于駱駝抗體的小尺寸，使其更容易接觸到三元復(fù)合物的界面。

值得一提的是，iTCR顯示出對(duì)CD1d和α-GalCer異常高的親和力，這樣即使是適度水平的α-GalCer及其結(jié)構(gòu)類似物也能充分激活iNKT細(xì)胞。有趣的是，這項(xiàng)新研究證明，VHH1D12不僅增強(qiáng)了CD1d–α-GalCer–iCTR相互作用，還增強(qiáng)了CD1d遞呈內(nèi)源性糖脂的低親和力相互作用。這一功能導(dǎo)致了更強(qiáng)的iNKT細(xì)胞介導(dǎo)的抗腫瘤免疫應(yīng)答。VHH1D12被證明在不額外添加外源性高親和力脂質(zhì)的情況下也能增強(qiáng)iNKT細(xì)胞介導(dǎo)的抗腫瘤保護(hù)。

圖4 VHH1D12可誘導(dǎo)I型 NKT 細(xì)胞的抗腫瘤活性，改善MM模型中動(dòng)物的生存（來源：Nature Cancer）

此外，需要指出的是，VHH1D12還展現(xiàn)出了對(duì)拮抗iNKT細(xì)胞功能的其它NKT細(xì)胞非恒定CD1d限制性TCRs的抑制活性。這意味著，VHH1D12在激活iNKT細(xì)胞的同時(shí)，還能阻斷其它NKT細(xì)胞的激活，從而增強(qiáng)iNKT細(xì)胞觸發(fā)的特異性抗腫瘤反應(yīng)。

Nature Cancer配發(fā)的一篇評(píng)論文章指出，總的來說，Lameris等人的工作為VHH1D12的治療潛力提供了令人信服的證據(jù)，并為目前正在開發(fā)的iNKT細(xì)胞相關(guān)療法增加了一個(gè)有價(jià)值的新成員。不過，根據(jù)目前的納米抗體和雙特異性單抗（bi-specific mAbs）臨床開發(fā)經(jīng)驗(yàn)，與傳統(tǒng)單克隆抗體相比，雙功能iNKT細(xì)胞激動(dòng)劑VHH1D12體內(nèi)壽命可能相對(duì)較短，因此，后續(xù)無疑需要仔細(xì)研究這類抗體的體內(nèi)藥效學(xué)特性。

參考資料：

[1] A nano-engager for iNKT cells in cancer.Nature Cancer(2020).

[2] Roeland Lameris et al. A single-domain bispecific antibody targeting CD1d and the NKT T-cell receptor induces a potent antitumor response. Nature Cancer(2020).